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維生素B6(VB6)還可以稱為吡哆素,它不是一個物質,包括了吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺,主要以磷酸脂的形式存在。VB6是一種水溶性的維生素,遇到光、堿、高溫容易被破壞。它溶入水和乙醇,在酸中是穩(wěn)定的。VB6在酵母菌、動物肝臟、魚肉、蛋、豆、花生等中含量豐富。當然,它也是人體內(nèi)不可缺少的維生素。參與多種代謝反應,特別是和氨基酸代謝有關。
實驗室檢測VB6的方法有多種,常規(guī)的有高效液相色譜(HPLC)法、氣相-質譜聯(lián)用(GC-MS)法。這里,用稍微簡單的HPLC方法。當然,需要做定性和定量分析,也可以使用質譜檢測器。
HPLC檢測條件:C18色譜柱,紫外檢測器291nm波長,流動相為0.04%戊烷磺酸鈉溶液:甲醇=85:15,柱溫:室溫,進樣量10uL。
樣品制備:上面已經(jīng)說過,VB6的化學性質比較特殊,在制備的過程中避免高溫、堿、光等破壞因素,根據(jù)操作說明,按部就班完成提取,用流動相溶解定量稀釋成0.1mg/ml的溶液,搖勻,靜置,備用。
標準曲線制作:選擇VB6標準品,制備成梯度稀釋的、不同濃度的標準溶液。在以上的檢測條件下,進行HPLC檢測,分別記錄進樣檢測出來的色譜峰高和峰面積數(shù)據(jù)。以標準溶液的峰高或峰面積為縱坐標,以對應濃度為橫坐標,在專業(yè)的軟件或工具的作用下繪制成一條曲線,并計算出方程和相關系數(shù)。
檢測樣品和計算結果:在和標準品檢測相同的條件下,進樣檢測樣品,在hplc上讀取數(shù)據(jù)。根據(jù)標準曲線的方法,將樣品的峰面積或峰高代入,求出對應的VB6的含量,考慮到實驗的誤差,一般都是要給出一個校正因子,對濃度進行一定的修正。