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香豆酸是一種內(nèi)酯類化合物,主要分布在禾科植物的莖稈中和豆科植物中,比如蘋果,葡萄,柚子,茄子,胡蘿卜,青椒,小麥,大麥,玉米,花生,核桃,杏仁,大豆等。它的化學式為C6H4O4,分子量為140.9,微溶于冷水,苯和氯仿,易溶于熱水,甲醇,乙醇等,不溶于二氯甲烷和石油醚。在科研過程中,香豆酸具有廣泛的藥理作用,如抗氧化,抗炎,免疫調(diào)節(jié),保護神經(jīng)等作用,被廣泛的用在醫(yī)藥,食品,日用品和飼料等領(lǐng)域。
檢測方法:高效液相色譜(HPLC)。
1.樣品處理
將含有香豆酸的樣本進行粉碎,過篩,并加入適量的甲醇進行溶解。超聲波處理,讓樣本中的香豆酸充分溶解到甲醇中,并通過0.22um的微孔膜過濾。
2.色譜條件
C18色譜柱,250mm長,4.6mm內(nèi)徑,5um粒徑;柱溫30℃。以0.1%甲酸水為流動相A,甲醇為流動相B,梯度洗脫,流速1ml/min。紫外檢測器,波長320nm,進樣量10uL。
3.標準曲線
將香豆酸的標準品進行溶解,可以用有機溶劑如甲醇,制成1mg/mL的標準溶液。進行梯度稀釋6個濃度,并記錄各個濃度值。依次上機測定色譜峰,對色譜峰面積進行積分。以濃度為橫坐標,色譜峰面積為縱坐標,在表格中的函數(shù)公式繪制出標準曲線,得到回歸方程,相關(guān)吸收r2一般要大于0.999。
4.樣品測定和計算
將制備好的樣本溶液也進樣到HPLC中,根據(jù)色譜峰的保留時間位置,可以獲得目標色譜峰。對色譜峰面積進行手工或自動的積分,代入回歸方程,可以計算出樣品中的香豆酸含量。