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飽和脂肪酸是指不含不飽和雙鍵的脂肪酸,它又分為單不飽和脂肪酸和多不飽和脂肪酸。它們沒有不飽和鍵,表現(xiàn)的很穩(wěn)定,不容易被氧化利用,會在組織或血液內堆積,攝入量過高會導致血膽固醇、三酰甘油、LDL-C升高。如肉豆蔻酸,棕櫚酸,硬脂酸,花生酸,月桂酸等,它們多數(shù)存在于動物脂肪和植物性脂肪中,如牛油,奶油,椰子油等。在人體內,飽和脂肪酸可以通過食物攝取或自身合成,是細胞膜,細胞器膜和脂蛋白等生物膜的重要成分之一。
檢測中長鏈飽和脂肪酸的含量,一般通過前處理并衍生化為揮發(fā)性甲酯,用氣相色譜(GC),氣相質譜(GC-MS),液相質譜(LC-MS)等測定。以氣相色譜為例,簡單的介紹一下操作流程。
1.樣品提取和衍生
稱取0.5g樣品,加入到15ml的透明離心管中,加入5ml的石油醚高速振蕩1min。置于50℃水浴中超聲提取30min,后4000r/min離心10min,轉移合并,50℃氮氣吹干。加入5ml的正己烷,3ml的CH3OH-KOH,0.5ml/L混勻。60℃烘箱中甲脂化30min,取出4000r/min 離心 10min,取上清液室溫氮氣濃縮至干用0.5ml正己烷溶解定容,混勻后過 0.22μm 濾膜待測。
2.色譜條件
以N2為載氣,流量30ml/min,H2流量30ml/min,空氣流量300ml/min,分離比50:1。DB-23色譜柱,30mx0.25mmx0.25um。程序升溫,初始溫度50℃保持1min,后以25℃/min升到175℃。再以4℃/min升高到230℃,保持10min。氫火焰離子檢測器(FID),溫度280℃。流量為1.0-1.5ml/min,進樣量1ul。
3.標準曲線
使用標準品進行溶解和稀釋,梯度稀釋成6個不同的濃度。在檢測限的范圍內,依次進樣到氣相色譜,測定它們的色譜峰。通過對色譜峰面積進行積分,并結合對應進樣的濃度,可以繪制標準曲線,得到回歸方程。考查相關系數(shù),回收率,重復性等。
4.樣品含量測定和計算
將制備好的樣品,進樣到氣相色譜中,通過保留時間是可以識別出對應的色譜峰。通過對樣品的色譜峰面積進行積分,代入到回歸方程,可以計算出樣品中的中長鏈飽和脂肪酸含量。