www.gbpe.cn
植物的根系集合了吸收和合成兩大功能,它的生長(zhǎng)情況和活力水平直接決定了上面植株的營(yíng)養(yǎng)狀況和產(chǎn)量。根系活力就是植物根系吸收水分和營(yíng)養(yǎng)的能力,以及根系對(duì)外部環(huán)境條件的反應(yīng)程度。在根系的微觀世界中,也發(fā)生了一系列的氧化、呼吸、合成等過(guò)程。
常用的檢測(cè)方法是比色法,這里簡(jiǎn)單介紹兩種權(quán)作參考,如果有需要進(jìn)一步的了解或測(cè)定,需要有專(zhuān)業(yè)的說(shuō)明和操作步驟,以便于準(zhǔn)確測(cè)定結(jié)果。
氯化三苯基四氮挫(TTC)法
檢測(cè)原理:TTC其實(shí)是一種氧化還原色素,它溶于水為無(wú)色溶液,但是還原后就會(huì)生成紅色的、不溶于水的三苯甲腙。生成的三苯甲腙是比較穩(wěn)定的,不會(huì)被空氣中的氧自動(dòng)氧化。植物根系中的脫氫酶能夠引起TTC發(fā)生還原反應(yīng),它可以廣泛的作為酶檢測(cè)的氫受體。因此,可以用TTC還原量來(lái)表示脫氫酶活力,并作為根系活力的指標(biāo)。
檢測(cè)過(guò)程包括標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作、樣品處理、樣品檢測(cè)和計(jì)算等步驟。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作:取一杯0.4%TTC溶液0.2ml放入10ml的量杯中,加入些許的Na2SO4粉搖勻后立即產(chǎn)生紅色的甲月替,再用乙酸乙酯定容至刻度,搖勻。最后分別取這個(gè)溶液0.25ml,0.50ml,1.00ml,1.50ml,2.00ml到10ml的容量瓶中,用乙酸乙酯定容至刻度。于是,就得到了含甲月替的25ug,50ug,100ug,150ug,200ug的標(biāo)準(zhǔn)比色系列,以空白做對(duì)照,在485nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度,制作標(biāo)準(zhǔn)曲線了。
樣品處理和檢測(cè):稱(chēng)取植物根系樣品,放入到燒杯中,加入0.4%TTC溶液和磷酸緩沖液的等量混合液10ml,把根充分浸泡在溶液內(nèi),在37℃保持1-3個(gè)小時(shí)。之后,加入1mol/L的硫酸,停止反應(yīng)。把根取出來(lái),吸干水分,放入研缽內(nèi),同時(shí)加入乙酸乙酯和少量的石英砂,在里面磨啊磨。提取出里面的甲月替,轉(zhuǎn)移到試管中,用乙酸乙酯洗滌幾次,最后再用乙酸乙酯定容。在分光光度計(jì)485nm的波長(zhǎng)處,檢測(cè)它的吸光度值,以空白作為參比,根據(jù)讀取的數(shù)據(jù),結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線,可以計(jì)算出四氮挫的還原量。還沒(méi)完呢,最后要計(jì)算根系活力的。四氮挫還原強(qiáng)度=四氮挫還原量/(根系重量x反應(yīng)時(shí)間)。